Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病人进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身抗微到消失1M-乳癌外科病因的令人满意部将在成年人时期就有更好的说明了，多个肝细胞自身抗微感染性的成年人中都有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的成年人这一比例提高到84%。相比较之下，占到外科1M-乳癌一半以上的M-1M-乳癌的胃癌系统还未获取充分的学绝技研究。

更为多的人开始用于分期系统来判别1M-乳癌的令人满意：个微在消失多种肝细胞自身抗微时转入第1阶段性，消失肝细胞素精神状态时转入第2阶段性，消失病因时转入第3阶段性。一些多发肝细胞自身抗微感染性的个微，在1期和2期，令人满意极快，并转型为胃癌的1M-乳癌。我们早先说明了了一分组在首次侦测到多种肝细胞自身抗微试样后至却是多10年无乳癌的却是慢令人满意者，这分组患儿次数却是多，但构造非常明确。随后，我们挖掘出肝细胞自身抗原特异性CD8+T细胞会质子化在令人满意很慢的患儿中都基本不存有，但在近期胃癌和长时间存有的乳癌患儿中都很容易侦测到。这可能会声称，与令人满意患儿相比较，这些患儿免疫性质子化的调节增强。

中期学绝技研究声称，尽管调节性T细胞会(Treg)数量正常，但乳癌患儿存有一些机制原因，其中都都有对IL-2的质子化潜能降低。此外，乳癌患儿中都的震荡CD4+T细胞会可能会对调节更具抵抗性，表现为震荡T细胞会的抑制作用减弱，连续性转化成的Treg和微外转化成的正向Treg，以及抗原随之而来的CD4+T细胞会中都IL-2质子化减弱。本学绝技研究的借此是说明了了CD4+调节性T细胞会(Treg)在海岸边却是很慢令人满意者中都的构造，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学绝技研究是一项以成年人辅以的纵向学绝技研究，在21岁请注意确诊的患儿亲属中都检查1M-乳癌的脆弱因素。我们早先说明了了长时间很慢令人满意者的构造，他们保持稳定多重肝细胞自身抗微感染性超过10年，但未消失乳癌的外科病因，慢性或非开展性免疫性。随后，10名继续保持稳定无乳癌并不想共享大量血液试样的很慢令人满意者纳入T和B细胞会机制深入学绝技研究。在迄今的学绝技研究中都，8名慢令人满意者(SP分组)，中都位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞自身抗微感染性。所有的参与者都处于1M-乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后一落千丈了肝细胞自身抗微对某些抗原的感染性质子化，然而，一名患儿已经处于2期至却是多6年，但未消失外科病因，一名患儿被检验为乳癌，该受试者72岁，在采自实验试样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据深入学绝技研究中都对该遗传物质开展了原则上评量。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会绝技和T细胞会抑制作用试验车评量遗传物质中都Treg的频部将、特异性和机制。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)开展无都由聚类深入学绝技研究，评量Treg特异性。

结果：与健康遗传物质相比较，来自慢令人满意微的梦境CD4+T细胞会的都由聚类说明了，激活的梦境CD4+ Treg频部将提高，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来提高有关。一名HbA1c升温的患儿与令人满意很慢者和匹配的对照分组相比较，Treg谱有所不同。机制结果声称，与健康遗传物质相比较，来自很慢令人满意微的Treg介导的CD4+震荡T细胞会抑制作用相对来说受损。表现为对震荡CD4+T细胞会CD25和CD134表达出来的抑制作用提高。

三幅1 深入的特异性深入学绝技研究说明了，CD4+Treg亚M-在慢令人满意队列中都提高。由FlowSOM生成的Treg室，周围在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标明物表达出来鉴别出10个元簇:梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用于9个不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个坦克部队(100个坦克部队)，极大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器分组周围上色。每个路由器中都的饼三幅对此单个标明的表达出来级别。(b)每个元聚类的热三幅，以说明了整微标明表达出来。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对总质量为每个metacluster装有直通三幅(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞会(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞会(l)。紫色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模M-证明，Treg频部将的提高是令人满意很慢的字样。分级奈斯(a - f)和柑橘深入学绝技研究(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的指标性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR表达出来开展分离，建模FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)分组以及遗传物质SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的频部将概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯集合的装有直通三幅;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来准确度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列彼此之间的不同。(j)装有直通三幅说明了了在SP(黑纹)和HD(灰点)分组中都，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对总质量(比例)。(k)直方三幅说明了每个簇的特异性(暗红色)和Treg标明相对表达出来与背景表达出来(红色);上列，文件系统Treg_3;示例一行，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中都标明的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

三幅3 与健康献血者相比较，令人满意很慢者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T细胞会元簇(梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表达出来标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表达出来串联，说明了直方三幅(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有遗传物质都有，p< 0.05(红色)遗传物质SP 606和匹配的HD不都有在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表达出来，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)串联，说明了直方三幅(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

三幅4 来自很慢令人满意的CD4+ treg细胞会控制震荡CD4+T细胞会的潜能降低。SP分组用红色的直通和带子对此，HD分组用黑色的直通和带子对此，紫色的直通/带子对此遗传物质sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(此番者)被标明为CFSE, Treg按推论的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠凋亡细胞会，养成3天后开展流式细胞会绝技侦测。(a-d)与CD4+此番者相对应的treg养成(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。用于感染性对照(激活的自发细胞会不含treg)计算抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入学绝技研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T细胞会对很慢令人满意的T细胞会凋亡的抑制作用更敏感。SP分组用红色的直通和带子对此，HD分组用黑色的直通和带子对此，紫色的直通/带子对此遗传物质sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标明，treg按推论的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠凋亡细胞会，养成3天后开展流式细胞会绝技(CD25反染)和细胞会因子深入学绝技研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同养成。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑制作用百分部将(b)。(c,d) CD25抑制作用百分部将(c)和CD134抑制作用百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入学绝技研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们证明了的正确性是，来自很慢令人满意子的凋亡梦境CD4+Treg在GITR表达出来中都获取了扩充和充沛，忽略了进一步学绝技研究Treg在1M-乳癌风险个微中都的表征的有效性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28